ІНСТРУКЦІЯ
для медичного застосування
Набір реактивів для визначення
концентрації сечовини в біологічних рідинах
Принцип методу
Сечовина з діацетилмонооксимом
у кислому середовищі в присутності тіосемікарбозиду та іонів трьохвалентного
заліза утворює забарвлений комплекс. Інтенсивність забарвлення пропорційна
концентрації сечовини в пробі.
Дослідний матеріал
Свіжа сироватка крові або
разведена сеча. Сечу перед дослідженням фільтрують, розводять фізрозчином у
співвідношенні 1:25-1:100 і результат множать на розведення.
Склад набору
1 .Реактив №1 - розчин
діацетилмонооксиму.
2.Реактив №2 - розчин
тіосемікарбозиду та солі заліза.
3.Калібрувальний розчин
сечовини 16,65 ммоль/л.
4.Сірчана кислота.
5.Трихлороцтова кислота 50%.
Характеристики набору
Лінійність
до 25 ммоль/л.
Коефіцієнт варіації не більше
5%.
Час інкубації
10 хв при 100°С.
Стабільність забарвлення не.
менше 15 хв.
Приготування робочого
розчину
У колбу на 100 мл влити близько
50 мл дистильованої води, кількісно додати вміст однієї ампули з реактивом №1
та однієї ампули з реактивом №2. Перемішати й одразу довести дистильованою водою
до мітки. Перелити в посуд для зберігання. Зберігати при +1°С-+5°С до 10 днів,
у посуді із темного скла.
Розчин сірчаної кислоти
У колбу на 200 мл влити близько
100 мл дистильованої води, кількісно додати вміст флакону із сірчаною кислотою.
Перемішати і довести дистильованою водою до мітки. Розчин стабільний.
Розчин трихлороцтової
кислоти (5% -й)
У колбу на 50 мл влити близько
30 мл дистильованої води, кількісно додати вміст ампули з трихлороцтовою
кислотою. Перемішати і довести дистильованою водою до мітки. Розчин стабільний.
Проведення аналізу
Внести в пробірки досліджувані
біологічну рідину та реагенти згідно з таблицею, не порушуючи послідовності:
|
Реагенти
|
Дослідна проба,мл
|
• Калібрувальна проба, мл
|
Контрольна проба, мл.
|
|
Робочий розчин Розчин
сірчаної кислоти Сироватка крові або розведена сеча Калібрувальний розчин
сечовини Дистильована вода
|
1
1
0,01
-
-
|
1
1
-
0,01
-
|
1 1
-
-
0,01
|
Реакційні суміші ретельно перемішують,
закривають ковпачками з алюмінієвої фольги та інкубують протягом 10 хвилин на
киплячій водяній бані. Після закінчення інкубації проби охолоджують під
проточною водою і вимірюють оптичну щільність дослідної і калібрувальної проби
проти контрольної проби в кюветах з товщиною поглинаючого шару 5 мм при довжині
хвилі 540 нм. Забарвлення стабільне протягом 15 хвилин після закінчення
інкубації. Розраховують концентрацію сечовини за формулою:
Ед
С = • 16,65 [мМоль/л],
Екал
де Ед і Екал - екстинції
досліджуваного зразка та калібрувального розчину, виміряні відносно контрольної
проби.
При визначенні сечовини в
ліпімічній або гемолітичній сироватці пробу депротеїнізують 5%-ю трихлороцтовою
кислотою. Для цього 0,1 мл сироватки змішують з 1,0 мл трихлороцтової кислоти і
центрифугують. Таким же чином готують пробу з калібрувальним розчином сечовини.
Для аналізу використовують 0,1 мл надосадової рідини. Використовуючи
трихлороцтову кислоту, можна досліджувати і цілісну кров.
Нормальні значення:
для сироватки - 2,5÷8,3
ммоль/л;
для сечі - 330÷580
ммоль/доб.
Примітки.
1. Не порушуйте послідовності змішування
реактивів: до робочого розчину спочатку додайте розчин сірчаної кислоти, тільки
потім - досліджувану рідину.
2. Температура водяної бані повинна бути 100°С.
3. Якщо вміст сечовини в сироватці крові вище
20 ммоль/л, сироватку розводять фізіологічним розчином, а результат множать на
розведення.
4. Ампули з розчином діацетилмонооксиму
(реактив №1), з розчином трихлороцтової кислоти та флакон з сірчаною кислотою
відкривати у витяжній шафі.
5. При великій кількості досліджень для
приготування робочого розчину використовують відразу дві ампули з реактивом №1
і дві ампули з реактивом №2, розчиняючи їх у 200 мл дистильованої води.
6. При малій кількості досліджень
рекомендується окремо розчинити ампулу з реактивом №1 і реактивом №2 у 50 мл
води кожну і зберігати розчини в посудинах із темного скла до двох місяців.
Робочий розчин готувати, змішуючи ці розчини в рівних пропорціях.
Термін і умови зберігання
Реактиви, з яких складається
набір, зберігаються при температурі +1-+5°С. Термін придатності набору 12
місяців від дня виготовлення. Не застосовувати після закінчення терміну
придатності.
