Набір реактивів для визначення заліза та загальної залізо-зв`язуючої здатності (3333) сироватки крові

ІНСТРУКЦІЯ

ПО ВИЗНАЧЕННЮ ЗАЛІЗА ТА ЗАГАЛЬНОЇ ЗАЛІЗОЗВ'ЯЗУЮЧОЇ ЗДАТНОСТІ (3333 )

СИРОВАТКИ КРОВІ

Призначення

Набір застосовують для кількісного визначення заліза та загальної залізо-зв'язуючої здатності (3333) сироватки крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях та науково-дослідницькій практиці.

Набір розрахований на 96 мікро- (фотометруємий об'єм 1,2 мл), 48 напівмікро-(фотометруємий об'єм 2,5 мл), 23 макровизначень (фотометруємий об'єм 5 мл) заліза чи таку ж саму кількість напівмікро-, макровизначень 3333 з холостою і калібрувальною пробами.

Діапазон концентрацій заліза (чи 3333), що визначаються - (4-200) мкмоль/л.

Коефіцієнт варіації визначення - не більш, як 5%.

Зберігання набору - при температурі від плюс 2 до плюс 25 °С.

Строк придатності набору - 12 місяців від дати випуску (вказана на упаковці)

Набір призначений для застосування ін вітро.

Склад набору

- буферний розчин (рН від 4,5 до 5,0) - 1 флакон (100±4) мл;

- колірореагент (феррозин (20±2) г/л) - 1 пробірка (2±0,1) мл;

- калібрувальний розчин заліза (20±0,5) мкмоль/л

- (112±3) мкг% - 1 флакон (8±О,5) мл;

- насичуючий розчин заліза (90±10) мкмоль/л - 1 флакон (50±2) мл;

- сорбент (лужний карбонат магнію) - 1 флакон (Ю±1) г;

- деіонізована вода - 1 флакон (8+0,5) мл.

Матеріал для аналізу

Сироватка, гепаринізована плазма.

Не застосовувати ЕДТО, оксалатну та цитратну плазму. Не застосовувати мутну (ліпемічну) чи гемолітичну сироватки - можливо отримання завищених результатів. Концентрація заліза стабільна на протязі 4 діб при кімнатній температурі.

Обладнання

1. Фотометричне обладнання, здатне вимірювати оптичну щільність розчинів в діапазоні (0-1) од при довжині хвилі (530-590) нм (максимум поглинання при 562 нм) та довжині оптичного шляху 1 або 0,5 см.

2. Пробірки об'ємом 10 мл (ГОСТ 1770-74Е).

3. Піпетки об'ємом 1, 0,1 та 5 мл (ГОСТ 29227-91).

4. Центрифуга для пробірок (швидкість від 2000 до 5000 об/хв).

Визначення концентрації заліза в сироватці (плазмі) крові

Принцип методу

Залізо звільняється з залізозв'язуючих пептидів сироватки крові та відновлюється завдяки дії гуанідину та гідроксиламіну. Натрієва сіль 3-(2-піріділ)-5,6-біс(4-сульфофеніл)-1,2,4-триазину (феррозину) дає з іонами Fe⁺² комплекс фіолетового кольору. Оптична щільність дослідного розчину пропорційна концентрації заліза в пробі.

Склад реакційного розчину в пробі

Феррозин > 1,10 ммоль/л; тіосечовина - 11,90 ммоль/л; гуанідину гідрохлорид -3,75 моль/л; гідроксиламіну гідрохлорид >60 ммоль/л; гліцин, НС1 - 0,2 моль/л.

Приготування робочих розчинів

Розчини готові та придатні до використання після відкупорювання флаконів протягом місяця при зберіганні від +2 до +8°С.

Проведення аналізу

Аналіз проводиться згідно зі схемою представленою у таблиці 1.

Таблиця 1

Відміряти у кювету, мл	Дослідна проба			Калібрув. проба			Холоста проба
Відміряти у кювету, мл	Мікро-аналіз	Напів-мікро-аналіз	Макро-аналіз	Мікро-аналіз	Напів-мікро-аналіз	Макро-аналіз	Мікро-аналіз	Напів-мікро-аналіз	Макро-аналіз
Буферний розчин	1,0	2,0	4,0	1,0	2,0	4,0	1,0	2,0	4,0
Сироватка (плазма)	0,2	0,5	1,0	-	-	-	-	-	-
Калібрувальний розчин	-	-	-	0,2	0,5	1,0	-	-	-
Деіонізована вода	-	-	-	-	-	-	0,2	0,5	1,0
Вимір, оптич. щільність	Едосл			Екал			-

Витримують 5-10 хв. при кімнатній температурі, виміряють оптичну щільність дослідної (Едосл) і калібрувальної (Е_Кдл) проб проти холостої. Фотометрування - див. Розділ "Обладнання".

Колірореагент	0,02	0,04	0,08	0,02	0,04	0,08	0,02	0,04	0,08
Вимір, оптич. щільність	Едосл'			Екал'			-

Перемішують, витримують 15-20 хв., виміряють оптичну щільність дослідної (Едосл') і калібрувальної (Е_Кдл') проб проти холостої з колірореагентом.

Розрахунок результатів

СзАЛІЗА = СкАЛІБРАТОРА * (Едрсл'-ЕдрСл)/(ЕкАл'-ЕкАл) (1)

де: Сзаліза - концентрація заліза в пробі (мкмоль/л чи мкг%);

Скалібратора - концентрація заліза в калібрувальному розчині (20 мкмоль/л

чи 112мкг%); Едосл, Ед_Осл', Екал , Е_Кал' - оптичні щільності розчинів (див. таблицю 1).

Нормальні показники вмісту заліза в сироватці

-Чоловіки: (9,5 - 29,9) мкмоль/л чи (53 - 167) мкг%

- Жінки: (8,8 - 27,0) мкмоль/л чи (49 -151) мкг%

- Новонароджені: (17,8-44,8) мкмоль/л чи (100 - 250) мкг%

- Немовля: (7,2 - 17,9) мкмоль/л чи (40 - 100) мкг%

- Діти віком до 14 років: (9,0 - 21,5) мкмоль/л чи (50 - 120) мкг%

Визначення загальної залізозв'язуючої здатності сироватки крові (3333)

Принцип методу

Трансферин в непатологічних сироватках зв'язує іони заліза до 1/3 свого об'єму. Для насичення трансферину сироватку обробляють надлишковою кількістю іонів Fe⁺³. Від не зв'язаних іонів заліза розчин звільняють за допомогою карбонату магнію. Визначаючи концентрацію заліза в насиченій сироватці, знаходять її загальну залізозв'язуючу здатність (3333) чи ТІВС. Різність між 3333 та залізом в сироватці крові - це ненасичена залізозв'язуюча здатність (НЗЗЗ) сироватки чи UIBC.

Проведення аналізу Аналіз проводиться згідно зі схемою, представленою у таблиці 2.

Таблиця 2

Відміряти у пробірку, мл	Напівмікроаналіз	Макроаналіз
Насичуючий розчин заліза	1,0	2,0
Сироватка (плазма)	0,5	1,0

Перемішують вміст пробірок та витримують їх (5-6) хв. при кімнатній температурі (від плюс 20 до плюс 25 °С).

Сорбент

(0,1-0,2) г (близько 0,5 мл)

(0,2-0,4) г (близько 1,0 мл)

Внести у пробірку сорбент в приблизній кількості згідно з таблицею. Тримають (5-10) хв. при кімнатній температурі (від плюс 20 до плюс 25 °С), збовтуючи кожні (2-3) хв. Центрифугують (9-Ю) хв. (2000 -5000 об/хв.) та проводять визначення концентрації заліза в супернатанті. Визначення проводять згідно з таблицею 1, з супернатантом замість сироватки.

Розрахунок результатів

Концентрацію заліза в супернатанті (знайдену за формулою 1) необхідно помножити на коефіцієнт розведення - 3. Отриманий результат означає 3333 (ТІВС). Для розрахунку ненасиченої залізозв'язуючої здатності, НЗЗЗ, сироватки (UIBC), із знайденого значення 3333 вилучають концентрацію заліза в сироватці чи плазмі крові.

% Насичення трансферину = Залізо у сироватці • 100/3333 (2)

Нормальні показники 3333 -Дорослі: 280-400мкг% чи 50 - 72 мкмоль/л.

Нормальні показники НЗЗЗ

-Дорослі: 180-260мкг% чи 32 - 46 мкмоль/л.

Нормальні показники насичення трансферину - Чоловіки: 20 - 50 %

-Жінки: 15-50%

Контроль якості

Достовірність отриманого результату перевіряється за тестуванням контрольних сироваток «Ліонорм» (Чехія) чи «Біоконт С» (Росія).

Примітки

1 Інтерпретація отриманих результатів - див. Знциклопедия клинических лабораторних тестов, под редакцией Н.У.Тица, стр. 570-571, «Лабинформ», Москва, 1997.

2 Кювети та лабораторний посуд, що використовується, повинні бути зовсім чистими та призначеними тільки для аналізу заліза. Мити використаний посуд слід в 20% розчині соляної кислоти (хч чи чда) або "хромовою" рідиною. Вимитий посуд ретельно полощуть деіонізованою чи бідистильованою водою.

3 До складу набору (буферний розчин та розчини заліза) входять небезпечні хімічні компоненти. При потраплянні розчинів на шкіру або слизову оболонку - треба негайно змити їх великою кількістю води.

УМОВИ ТА ТЕРМІН ЗБЕРІГАННЯ.

Зберігання набору - при температурі від плюс 2 до плюс 25 °С.

Строк придатності набору - 12 місяців від дати випуску (вказана на упаковці)