Набір реактивів для визначення загального кальцію в біологічних рідинах

ІНСТРУКЦІЯ

ПО ФОТОМЕТРИЧНОМУ ВИЗНАЧЕННЮ ЗАГАЛЬНОГО КАЛЬЦІЮ В БІОЛОГІЧНИХ РІДИНАХ

СКЛАД НАБОРУ

1. Хромоген - 1 флакон (120±4) мл;

о-крезолфталеїн комплексон - (0,12 ±0,01) ммоль/л

8-оксіхінолін - (16,0 + 0,16) ммоль/л

хлористоводнева кислота - (60,0 ± 6,00) ммоль/л

2. Буфер - 1 флакон (120±4) мл;

Моноетаноламін - (0,8 ± 0,08) моль/л

3. Калібрувальний розчин кальцію (2,5 ± 0,05) ммоль/л

чи (10 ± 0,2) мг% - 1 флакон (5±0,5) мл.

ПРИЗНАЧЕННЯ

Набір призначений для кількісного визначення загального кальцію в біологічних рідинах в клініко-діагностичних та біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій роботі.

Набір розраховано на ПО напівмікро- (фотометруємий об'єм 2 мл), 44 макровизначень (фотометруємий об'єм 5 мл) загального кальцію (з урахуван-ням холостих та калібрувальних проб).

Діапазон концентрацій кальцію що визначаються - 0,125-4 ммоль/л чи 0,5-16 мг%.

Коефіцієнт варіації у серії - не більш як 3%.

Набір призначено для застосування ін вітро.

ПРИНЦИП МЕТОДУ: Іони кальцію в лужному середовищі реагують з о-крезолфталеїн комплексоном і утворюють кольоровий комплекс. Інтенсив-ність фіолетового кольору комплексу пропорційна концентрації кальцію в дослідній пробі.

МАТЕРІАЛ

Сироватка, натще; брати кров при мінімальному передавленні вени, без напруження м'язів чи після відновлення кровообігу впродовж 1 хвилини.

Плазма. Як антикоагулянт необхідно застосовувати тільки гепарин. Інші речовини, такі як ЕДТО, оксалат, фторид, цитрат заважають визначенню кальцію.

Сеча, добова. Збирати в ємність, що містить 10 мл НС1, 6 моль/л, або підкислити після збору до рН<2,0 для розчинення солей Са.

Спиномозкова рідина (СМР).

УСТАТКУВАННЯ

1. Фотометричне устаткування, що забезпечує вимір оптичної щільності при 570 (550-590) нм у діапазоні (0-1,0) од. Кювета з довжиною оптичного шляху 5 або 10 мм.

2. Пробірки об'ємом 10 мл (ГОСТ 1770-74Е).

3. Піпетки об'ємом 0,1 і 5 мл (ГОСТ 29227-91).

ГОТУВАННЯ РОБОЧИХ РОЗЧИНІВ

Для варіанта аналізу з використанням БІРЕАГЕНТУ всі розчини готові для роботи. Придатні для роботи до закінчення терміну зазначеного на упаковці, за умови збереження при температурі від плюс 2 до плюс 8 °С.

Для варіанта аналізу з використанням МОНОРЕАГЕНТУ змішати рівні об'єми буфера і хромогену. МОНОРЕАГЕНТ придатний для роботи 2 дні при температурі від плюс 15 до плюс 25 °С або 4 дні при температурі від плюс 2 до плюс 8 °С (за умови його збереження в пластиковому посуді).

ПРОВЕДЕННЯ АНАЛІЗУ

Аналіз проводиться у відповідності зі схемою поданої в таблиці.

Варіант аналізу	Відміряти в кювету, мл	Холоста проба		Калібрувальна проба			Дослідна проба
Варіант аналізу	Відміряти в кювету, мл	Напівмікро аналіз	макроаналіз	Напівмікро аналіз		макроаналіз	Напівмікро аналіз	макроаналіз
монореагент	Монореагент	2,00	5,00	2,00		5,00	2,00	5,00
	Матеріал	-	-	-		-	0,02	0,05
	Калібрувальний р-н	-	-	0,02		0,05	-	-
біреагент	Хромоген	1,00	2,50	1,00	2,50		1,00	2,50
	Матеріал	-	-	-	-		0,02	0,05
	Калібрувальний р-н	-	-	0,02	0,05		-	-
	Буфер	1,00	2,50	1,00	2,50		1,00	2,50
Змішують і витримують (10±1) хв. при кімнатній температурі (від плюс 20 до плюс 25°С). Вимірюють (не пізніше (30+5) хв.) оптичну щільність дослідної проби (Едослід.) і калібрувальної проби (Е_каліб_Р.) проти холостої проби. Фотометрирування - див. розділ "Устаткування".

РОЗРАХУНОК РЕЗУЛЬТАТІВ

Кальцій (ммоль/л) = 2,5 • Е_ДОСЛі_Д,/Е_{калібі)}, _або

КаЛЬЦІЙ (МГ%) = 10 • Едрслід/Екалібр.

Для розрахунку концентрації кальцію у добовій сечі отримане вище значення (ммоль/л) множать на об'єм добової сечі виражений у л (одержують ммоль/добу), або значення (мг %) множать на об'єм добової сечі виражений в л та коефіцієнт 10 (одержують мг/добу).

РЕФЕРЕНТНІ МЕЖІ ^*

Сироватка або плазма, норма	мг/100 мл	(мг %) ммоль/л
- Кров з пуповини:	8,2-11,2	2,05 - 2,80
- Недоношені:	6,2-11,0	1,55-2,75
- 0-10 діб:	7,6 - 10,4	1,90-2,60
- 10 діб - 24 місяці:	9,0-11,0	2,25 - 2,75
- 24 місяці - 12 років:	8,8-10,8	2,20 - 2,70
- 12-18 років:	8,4-10,2	2,10-2,55
- 18-60 років:	8,6-10,0	2,15-2,50
- 60-90 років:	8,8-10,2	2,20-2,55
- старше ніж 90 років:	8,2- 9,6	2,05 - 2,40
СМР, норма	мг/ 100 мл (мг %)	ммоль/л
-	4,2- 5,4	1,05-1,35
Сеча, добова, норма	мг/добу
ммоль/добу
- Відсутність Са у дієті:		5-40 0,13
1,00
- Споживання Са нижче середнього рівня:		50-150 1,25
3,75
- Середній рівень споживання Са:*		100 - 300 2,50
7,50

* - Середній рівень споживання Са - 800 мг/добу (20 ммоль/добу).

КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ

Для оцінки правильності визначення придатні контрольні сироватки, атестовані даним методом (Ліонорм У, Ліонорм П, Біоконт С).

ПРИМІТКИ

1. Об'єми розчинів можно пропорційно змінити, зберігаючи співвідношення монореагент : зразок = 100 : 1, або хромоген : буфер : зразок = 50:50:1.

2. Якщо концентрація кальцію в зразку перевищує 4 ммоль/л його розбавляють у співвідношенні 1:1 дистильованою водою. Отриманий результат множать на 2.

3. Кювети і посуд, що використовуються при аналізі повинні бути цілком чистими, спеціально підготовленими, тобто замоченими на декілька годин у НС1 (концентрація біля 2 моль/л), а потім ретельно промитими.

4. Значення загального Са в СМР тісно корелюють із концентрацією іонізованого Са в сироватці. СМР не віддзеркалює змін рівня Са в сироватці при гіпопаратиреозі. Збільшення рівня загального й іонізованого Са в СМР зустрічається при станах, що супроводжуються підвищенням вмісту білка в СМР⁶⁾.

5. Медикаментозні субстанції що підвищують рівень кальцію в сироватці крові: лужні антациди, андрогени, солі Са, калюстерон, даназол, діетилстильбестрол (швидке підвищення за 24 години у хворих раком молочної залози), дігідротахистерол, постійне застосування діуретинів (включаючи хлоталідон, етакринову кислоту, фуросемід, тіазиди), ергокальциферол, ізотретиноін, літій, прогестерон, парат-гормон, тамоксифен, тестолактон, вітамін Д, вітамін А \

6. Медикаментозні субстанції що знижують рівень кальцію в сироватці крові: альбутерол, альпростадил, аміноглікозиди (наприклад, гентаміцин), аспарагіназа, барбітурати у літніх людей, кальцитонін, карбамазепін, карбенолоксон, карбоплатин, кортикостероїди; діуретини (пусковий ефект), включаючи ацетазоламід, етакринову кислоту, фуросемід; естрогени (після початку менопаузи), флориди, гастрин, глюкагон, глюкоза, індапамід, інсулін, ізоніазід, проносні (при надмірному вжитку), солі магнію, метицилін, фенітоїн, фосфати, плікаміцин, ізотонічний розчин хлориду натрію (при гіперкальціємії), тетрациклін (у вагітних)⁶⁾.

7. Визначенню заважають: (занижують результат) фториди, оксалати, цитрати, ЕДТО, сульфати; (завищують результат) солі Са (можливе забруднення дист. води або посуду), хлорпропамід, жирові емульсії. Найнижчі значення Са в сироватці протягом доби спостерігаються в 02.00 - 04.00, найвищі - у 20.00. Вертикальне положення протягом 15 хвил. викликає підвищення рівня Са на 4 - 7 % (мінімальна зміна рівня іСа). Загальна концентрація Са в сироватці залежить від концентрації білка. При зміні останньої на 1 г/100 мл (10 г/л) відбувається рівнобіжна зміна концентрації Са на приблизно 0,8 мг/100 мл (0,2 ммоль/л). Помилкове підвищення рівня Са в сироватці може бути обумовлено венозним стазом при відбиранні проби і тривалому збереженні крові. У зв'язку з тим, що солі Са осаджуються на склі, необхідно використовувати ретельно підготовлені шприци, контейнери і скляний посуд. Для діагностики гіперпаратиреозу необхідні повторні дослідження, оскільки часом рівень загального Са знаходиться в межах норми, а іСа підвищений. При зниженні рівня Са нижче 6,0-7,0 мг% (1,5-1,75 ммоль/л) може розвитися тетанія, а при метаболічному і респіраторному алкалозі тетанія може виникати при нормальному рівні загального Са в сироватці (але низькому іСа)⁶⁾.

УМОВИ ТА ТЕРМІН ЗБЕРІГАННЯ.

Зберігання набору - при температурі від плюс 2 до плюс 8 °С.

Строк придатності набору - 12 місяців від дати випуску (вказана на упаковці)