І
Н С Т P У К Ц І Я
для
медичного застосування набоpу pеактивів для визначення
серомукоїдів
у біологічних рідинах турбідиметричним методом
Пpинцип: білки осаджують хлорною
кислотою та вилучають центрифугуванням; мукоїди, що залишаються в супернатанті,
осаджують фосфорновольфраматом. За ступенем помутніння розчину визначають вміст
серомукоїдів у дослідному матеріалі. Для побудови калібрувального графіка
використовують сульфат барію, що утворюється в результаті взаємодії хлориду
барію та сірчаної кислоти.
Склад набору
1.
1,8Н розчин
хлорної кислоти - 20 мл.
2.
5% розчин
фосфорновольфрамової кислоти в 2Н розчині соляної кислоти - 9,5 мл.
3.
0,3Н розчин
сірчаної кислоти - 10 мл.
4.
0,01Н розчин
хлориду барію - 2,5 мл.
Приготування робочих розчинів
1.
Робочий
розчин хлорної кислоти.
Кількісно перенести 20 мл хлорної
кислоти в мірну колбу на 100 мл, довести до мітки дистильованою водою,
перемішати.
2.
Розчин
фосфоровольфрамату.
У мірний циліндр на 50 мл кількісно
перенести вміст флакона з суспензією фосфорновольфрамової кислоти і довести до
мітки “40” дистильованою водою, перемішати.
3.
Розчин
хлористого барію.
Із ампули піпеткою відібрати точно
2 мл розчину і внести в мірну колбу на 50 мл, довести до мітки дистильованою
водою, перемішати.
4.
Розчин
сірчаної кислоти. Розчин готовий до роботи.
Проведення аналізу. 0,5 мл сироватки змішують з
4,5 мл фізіологічного розчину і додають по краплях 2,5 мл розчину хлорної
кислоти. Вміст пробірки добре перемішують скляною паличкою, залишають на 10 хв
при кімнатній температурі, центрифугують 15 хв при 2500 – 3000 об/хв.
Відміряють 5 мл центрифугата,
додають 1 мл розчину фосфоровольфрамату і через 15 хв вимірюють мутність проби
на фотоелектричному колориметрі в кюветі з товщиною шару 10 мм при довжині
хвилі 630–640 нм (червоний світлофільтр) проти контрольної проби, в яку замість
сироватки вносять 0,5 мл фізіологічного розчину.
Побудова калібрувального
графіка. Змішують
розчини згідно з таблицею, струшують і відразу вимірюють екстинцію на
фотоелектроколориметрі, будують калібрувальний графік.
|
Відносні одиниці мутності
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
|
Розчин хлориду барію (мл)
|
0,1
|
0,2
|
0,3
|
0,4
|
0,5
|
0,6
|
0,7
|
0,8
|
|
Дистильована вода (мл)
|
4,9
|
4,8
|
4,7
|
4,6
|
4,5
|
4,4
|
4,3
|
4,2
|
|
Розчин сірчаної кислоти (мл)
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
Розрахунок результатів. Розрахунок вмісту
серомукоїдів визначають за калібрувальним графіком, побудованим на основі
колориметрування суспензії сульфату барію в відносних одиницях мутності.
Нормальні значення серомукоїдів: 0-5
відносних одиниць мутності, або 0,130- 0,200 умовних одиниць оптичної
щільності, що відображають різницю екстинції проби та екстинції контрольної
проби. В останньому випадку калібрувальний графік не використовують.
Умови зберігання. Реактиви з яких складається набір
зберігаються при температурі +1+5ºС.
Термін придатності. Вказаний на упаковці.
ПРИМІТКА: центрифуги з обертами
менше ніж 2500 за хвилину не дозволяють відокремити осад білків від мукоїдів, тому
після центрифугування на низьких обертах центрифугат фільтрують через паперовий
фільтр (синя смужка).
