Набір реактивів для імунорадіометричного аналізу поверхневого антигену гепатиту в з використанням радіонукліду 125і (ipma-hbsag-125i)

ІНСТРУКЦІЯ

для медичного застосування

набору реактивів для імунорадіометричного аналізу

поверхневого антигену гепатиту В з використанням радіонукліду 125І

( ІРМА-НBsAg-125І )

Kit of reactants for immunoradiometric assay of antigene superficial hepatites B for use radionuklide 125I ( ІRМА-НBsAg-125І )

Загальна характеристика:

склад набору:

Препарат ¹²⁵І–антитіла до HBsAg ( по 5,5 мл ) з активністю

у флаконі 85-185 кБк - 2 флакони,

позитивний контрольний зразок HBsAg ( 0,7 мл ) - 1 флакон,

негативний контрольний зразок HBsAg ( 1,5 мл ) - 1 флакон,

пробірки з імобілізованими моноклональними антитілами - 100 шт.

Фармакотерапевтична група. Діагностичні радіофармацевтичні засоби. Код АТС V-09.

Призначення набору. Набір призначений для кількісного визначення наявності поверхневого антигену гепатиту В у малому об’ємі сироватки або плазмі крові людини методом конкурентного імунорадіометричного аналізу “іn-vitro”.

Характеристика набору. Набір розрахований на проведення аналізу в дублікатах 40x2 дослідних проб, 6 проб позитивного і 14 проб негативного контрольних зразків HBsAg (усього 100 визначень).

Запобіжні заходи при роботі з набором. Реактив ¹²⁵І - антитіла до HBsAg є джерелом м’якого гамма-випромінювання. Період піврозпаду радіонукліду ¹²⁵І - 60,04 доби.

При роботі з набором треба додержуватися правил роботи з радіоактивними речовинами (РР) за групою В (Норми радіаційної безпеки НРБУ-97 та Основні санітарні правила протирадіаційного захисту (ОСПУ) роботи з радіоактивними речовинами й іншими джерелами іонізуючих випромінювань).

Увага!

Хімічний посуд і устаткування, що використовуються при роботі з РР, повинні бути відповідним чином марковані і зберігатися окремо.

Забороняється при роботі з РР мати на робочому місці стороннє устаткування й особисті речі.

Категорично забороняється прийом їжі, використання косметичних засобів, паління в помешканнях, призначених для роботи з РР.

У сироватці крові, використаної як компонент набору, не виявлено вірусів ВІЛ і гепатиту В. Проте компоненти набору слід розглядати як потенційне джерело вірусної інфекції і використовувати при роботі з набором одноразові гумові або пластикові рукавички.

Устаткування і матеріали, необхідні для проведення аналізу:

Напівавтоматичні піпетки зі змінними наконечниками, що дозволяють

відбирати обсяги рідин 0,1; 1,5;

штатив для пробірок;

водоструминий насос;

гамма-лічильник, що дозволяє вимірювати активність ізотопу [¹²⁵J];

стрічка поліетиленова з липким шаром або плівка поліетиленова;

дистильована вода.

Підготування реагентів для аналізу. Перед початком роботи всі компоненти набору повинні мати кімнатну температуру (+18... +25⁰С).

Проведення аналізу.

Пронумерувати пробірки. Необхідну кількість пробірок вибрати з розрахунку:

на позитивний контрольний зразок - 3 пробірки (пробірки 1 - 3),

на негативний контрольний зразок - 7 пробірок (пробірки 4 - 10),

на кожний невідомий зразок сироватки - 2 пробірки (по дві на кожну аналізовану сироватку, наприклад, пробірки 11,12. .... 99, 100).

Вставити пробірки в штатив для пробірок. Розкрити флакони.

У пронумеровані пробірки внести за допомогою піпетки реактиви; у пробірки 1 - 3 -

позитивний контрольний зразок HBsAg по 0,1 мл; у пробірки 4 - 10 - негативний контрольний зразок HBsAg по 0,1 мл; у пробірки II, 12 - 99, 100 - аналізовану сироватку або плазму по 0,1 мл.

Розчини в пробірки вносити, доторкаючись наконечником піпетки до внутрішньої поверхні стінки пробірки біля самого дна. Легким постукуванням по пробірках домогтися горизонтальності рівня рідини в них.

Закрити пробірки поліетиленовою стрічкою з липким прошарком або поліетиленовою плівкою, яку необхідно прикріпити до штатива тонким гумовим кільцем.

Витримати пробірки 12-16 годин при температурі 18-25°С.

Видалити вміст пробірок за допомогою водоструминного насоса з пасткою для збору рідини.

Промити пробірки дистильованою водою порціями по 1,5 мл. Операцію промивання повторити три рази, старанно видаляючи воду з пробірок за допомогою водоструминного насоса з пасткою для збору рідини після кожного промивання.

Витягти флакон з реактивом 1-антитіла до НВsАg із коробки. Витримати 30-40 хвилин при температурі 18-25°С.

Розкрити флакон з реактивом 1-антитіла до НВsАg.

Внести в кожну пробірку по 0,1 мл реактиву 1-антитіла до НВsАg .

Стежити за тим, щоб весь реактив потрапив на дно пробірки. Легким постукуванням по пробірках домогтися горизонтальності рівня рідини в них.

Закрити пробірки поліетиленовою стрічкою з липким прошарком або поліетиленовою планкою, яку необхідно прикріпити до штатива тонким гумовим кільцем.

Витримати пробірки 4-6 годин при температурі 18-25°С.

Видалити вміст пробірок за допомогою водоструминного насоса з пасткою для збору рідини.

Промити пробірки дистильованою водою порціями по 1,5 мл шість разів, старанно видаляючи воду з пробірок за допомогою водоструминного насоса з пасткою для збору рідини. Останню порцію рідини видалити найбільш старанно.

Виміряти активність ¹²⁵I у кожній пробірці за допомогою гамма-лічильника. Час виміру –

I хвилина.

Розрахунки.

Визначити кількість фонових імпульсів - (N_ф), що реєструються лічильником за I хвилину, експлуатуючи лічильник у режимі роботи “Вимір” 5 хвилин (С) без внесення в нього радіоактивного зразка.

Фон лічильника (N_ф) знайти за формулою:

N_ф= ------- .

Обчислити середню кількість (А) зареєстрованих лічильником імпульсів при вимірі позитивних контрольних зразків у пробірках 1-3 за формулою:

N₁ +N₂+N₃

А= ------------------- - N_ф .

Розрахувати середню кількість (В) зареєстрованих лічильником імпульсів при зміні активності негативних контрольних зразків у пробірках 4-10 за формулою:

N₄ +N₅+ . . . +N₉ +N₁₀

В = ------------------------------------ - N_ф .

Обчислити відношення А / В. Воно повиннео бути не менше 5.

Знайти нижню межу позитивних результатів ( N_m) для досліджуваних проб за формулою

N_m = 2,1 В + N_ф .

Якщо кількість зареєстрованих лічильником імпульсів при вимірі активності в досліджуваній пробі перевищує розмір N_m , то даний зразок сироватки або плазми розглядається, якщо містить НВsАg .

Аналітичні характеристики набору.

Мінімальна концентрація НВsАg, яка може бути отримана за допомогою набору, становить 5.10^-9 г/мл.

Специфічність.

Всі негативні результати, отримані за допомогою набору, є істинно негативними.

Серед позитивних результатів аналізу можливі “хибно-позитивні". Причини “хибно- позитивних” відповідей можуть бути такими:

забруднення проб матеріалом позитивних зразків;

радіоактивне забруднення пробірок;

недостатнє промивання пробірок після інкубації з ¹²⁵I - НВsАg.

Припускається постановка аналізу невідомої сироватки без дублювання.

Всі позитивні результати, отримані при постановці аналізу без дублювання, й усі випадки розбіжностей результатів постановки в дублікатах рекомендується перевіряти повторною постановкою аналізу.

Якщо при повторній постановці позитивні результати підтверджуються, то їх слід вважати істинно позитивними, а якщо не підтверджуються - “хибно-позитивними” і розцінювати як негативні.

Особливості застосування набору. Якщо в процесі експлуатації набір використовується кілька разів, то при кожній постановці необхідно знову провести аналіз трьох позитивних і семи негативних контрольних проб і результати обробити відповідно до інструкції.

Для одержання надійних результатів необхідно суворе дотримання інструкції для застосування набору і кваліфіковане проведення аналізу.

Умови та термін зберігання. Набір зберігати у темному сухому місці при температурі 2-8 ⁰С протягом 45 діб з дати виготовлення або при температурі до 25 ⁰С протягом не більше 5 діб.

У випадку неповного використання компонентів набору можливе їх багаторазове використання протягом всього терміну придатності при дотриманні умов зберігання.

Поставляються тільки в спеціалізовані медичні заклади, що мають дозвіл на роботу з радіоізотопними препаратами.